Open Universiteit

Please use this identifier to cite or link to this item: http://hdl.handle.net/1820/6063
Title: Development of a Confirmatory Method for the Detection of Recombinant Bovine Somatotropin in Serum of Dairy Cattle.
Other Titles: Ontwikkeling van een confirmatiemethode voor de detectie van recombinant bovine somatotropine in serum van melkvee.
Authors: Smits, Nathalie
Issue Date: 31-Jul-2013
Publisher: Open Universiteit
Citation: Smits, Nathalie. (2013). Development of a Confirmatory Method for the Detection of Recombinant Bovine Somatotropin in Serum of Dairy Cattle [Ontwikkeling van een confirmatiemethode voor de detectie van recombinant bovine somatotropine in serum van melkvee]. (Unpublished MSc Master’s Thesis Environmental Sciences), Open Universiteit, Heerlen, NL.
Abstract: ABSTRACT. Administration of recombinant bovine somatotropin (rbST) enhances milk yield in dairy cattle. Use of rbST for this purpose is approved in several countries, however, prohibited in the European Union. To pinpoint rbST abuse confirmatory methods are required to confirm a positive screening result. Confirmatory analysis are a challenge due to the similarity of rbST with the endogenous hormone (bST), low concentrations of rbST in the blood circulation after administration and the short half-life of rbST. Moreover, the serum matrix, high abundant in proteins, interferes in LC-MS/MS methods by suppressing the rbST signal. If at all measurable, these methods are in need of high sample volumes in order to reach the necessary sensitivity. Therefore a novel approach of sample treatment, which overcomes these challenges, is presented in this study. A new magnetic bead based immunoaffinity step is developed for rbST capture from the serum prior to LC-MS/MS measurement. After the rbST capture step, the serum matrix is removed, therewith removing interfering proteins. RbST is then eluted from the beads and LC-MS/MS confirmation analysis is performed. This novel approach enables rbST measurements far below the required 10 ng mL-1, necessary for effective control. Preliminary results of rbST measurements on a selection of serum samples from one rbST treated cow are presented. The data demonstrate that this novel approach is capable to identify rbST in serum from a treated cow from the 6th day after treatment onwards.
Description: SAMENVATTING. Door recombinant somatotropine (rbST) aan melkvee toe te dienen kan de melkproductie verhoogd worden. Dit is in verschillende landen toegestaan waaronder de USA, maar verboden in de Europese Unie. Om rbST misbruik aan te kunnen tonen zijn methoden voor de bevestiging van positieve screeningsresultaten nodig. Deze bevestiging van rbST is een uitdaging vanwege de overeenkomst met het endogene hormoon (bST), de lage rbST concentraties die na toediening in het bloed circuleren, de korte halfwaarde tijd en daarnaast signaal suppressie in de LC-MS/MS door storende eiwitten afkomstig van de complexe serum matrix. Om rbST met de benodigde gevoeligheid direct in serum te kunnen meten, zal daarom het monster volume groot moeten zijn. Om rbST gebruik te kunnen bevestigen wordt, in dit rapport, een nieuwe voorbewerkingsmethode voor serum gepresenteerd. Voorafgaand aan LC-MS/MS wordt een, op magnetische beads gebaseerde immunoaffiniteits stap uitgevoerd om rbST uit het monster te binden en te concentreren. Na binding van het rbST aan de magnetische beads, wordt de serum matrix en de daarmee storende eiwitten verwijderd. Het rbST wordt vervolgens van de magnetische beads geëlueerd waarna confirmatie met LC-MS/MS plaats kan vinden. Deze nieuwe methode maakt het mogelijk om concentraties lager dan, de voor effectieve controle benodigde, 10 ng mL-1 te meten. Deze nieuwe methode is toegepast op een selectie van serum monsters van een met rbST behandelde koe, en de verkregen resultaten worden in dit rapport gepresenteerd. Deze data laten zien dat het met deze nieuwe methode mogelijk is om rbST in behandelde koeien vanaf de 6e dag na behandeling te meten.
URI: http://hdl.handle.net/1820/6063
Appears in Collections:MSc Environmental Sciences

Files in This Item:
File Description SizeFormat 
MSc Research Thesis SMITS_Nathalie 2013.pdf1.93 MBAdobe PDFView/Open


Items in DSpace are protected by copyright, with all rights reserved, unless otherwise indicated.